Мембраны для вестерн-блоттинга

Мембраны для вестерн-блоттинга в лаборатории

Для вестерн-блоттинга в лаборатории используются два основных типа мембран: нитроцеллюлозные (NC) и ПВДФ (поливинилидендифторидные).
Выбор между ними зависит от конкретных экспериментальных целей, таких как метод детекции, размер целевого белка и необходимость повторного использования мембраны.

Выбор мембраны для вестерн-блоттинга — это всегда баланс между прочностью, фоновым шумом и удерживающей способностью.

1) Нитроцеллюлозные мембраны (NC) — эЭто классический вариант, который любят за простоту и чистоту результата. Белки прикрепляются к ней за счет комбинации гидрофобных и электростатических взаимодействий:
• Главный плюс: Очень низкий фоновый сигнал. Она практически не дает «шума» при детекции, поэтому картинка получается контрастной
• Удобство: Мембрана сразу готова к работе — её достаточно просто смочить в буфере для переноса или воде
• Минус: Она очень хрупкая. После высыхания мембрана становится ломкой, как чипсы, поэтому её сложно использовать для «стриппинга» (смывки антител для повторного окрашивания другими)

2) ПВДФ-мембраны (PVDF) это более современный и технологичный материал (поливинилиденфторид):
• Главный плюс: Невероятная прочность. Её можно гнуть, резать, многократно промывать и проводить до 5-10 циклов переокрашивания (стриппинг/репробинг)
• Связывающая способность: У PVDF она выше, чем у нитроцеллюлозы. Это позволяет «поймать» даже те белки, которых в пробе совсем мало
• Особенность подготовки: Мембрана гидрофобна, поэтому её обязательно нужно сначала активировать в 100% метаноле (или этаноле) в течение нескольких секунд, иначе белки на неё просто не сядут
• Минус: Склонна давать более высокий фон, особенно если использовать флуоресцентные методы детекции

Независимо от материала, мембраны бывают двух видов:
• 0,45 мкм: Стандарт для большинства белков (от 20 кДа и выше)
• 0,2 мкм: Обязательны, если вы работаете с низкомолекулярными белками и пептидами (менее 15-20 кДа). Через крупные поры такие белки могут просто «пролететь» насквозь во время переноса

Рекомендации по выбору:
• Для большинства стандартных применений с хемилюминесцентной детекцией подойдет нитроцеллюлозная мембрана с размером пор 0,45 мкм (например, Bio-Rad’s 0.45 µm nitrocellulose membrane) благодаря низкому фоновому сигналу и простоте использования
• Для низкомолекулярных белков (<15-20 кДа) рекомендуется использовать мембрану с размером пор 0,2 мкм, независимо от материала, чтобы предотвратить прохождение белков через поры
• Для флуоресцентной детекции, секвенирования белков или экспериментов с многократным стриппингом лучше выбрать ПВДФ-мембрану, отдавая предпочтение специальным низкофоновым версиям для флуоресценции

Покупая лабораторные мембраны для вестерн-блоттинга импортного и российского производства у дилера в России, компании «Лабораторное оснащение», вы получаете: гибкие условия поставок, доставку во все регионы России, гарантию производителя, сервис и обслуживание, подбор аналогов, комплектующих и самые лучшие цены!