Разработан быстрый метод ИФА на основе ПЦР-диагностики гена зеленого белка
Передовые генетические экраны у дрозофил сыграли важную роль в выяснении клеточных и молекулярных путей, которые управляют почти всеми аспектами биологии. Однако современные методы скрининга дрозофилы либо быстры, но ограничены в своей специфичности, либо основаны на визуализации, требующей значительных знаний, времени и затрат.
Дрозофила предлагает обширный набор транскрипционных репортеров на основе ПЦР-диагностики гена зеленого белка (GFP), также белков, помеченных GFP, и линий драйверов, которые могут быть использованы для экспрессии GFP в многочисленных субпопуляциях клеток. Таким образом, инструмент, который может быстро и количественно оценить уровни GFP в ткани дрозофилы, послужил бы широко применимой платформой для скрининга.
Ученые разработали быстрый метод ИФА на основе GFP, в котором идентифицировали гены, необходимые для элиминации астроцитарных синапсов. Этот метод при использовании оборудования для ИФА обеспечивает платформу для скрининга, которая является быстрой, доступной и широко применимой ко многим путям и процессам. Новый иммуноферментный анализ на основе GFP называется ELISA. Он может обнаруживать GFP в лизатах дрозофилы, собранных у целых животных и препарированных тканей на всех стадиях развития дрозофилы.
Новый анализ может обнаруживать локализованные на мембране GFP в различных популяциях нейроны и глиальные клетки. Он может идентифицировать гены, которые изменяют морфологию этих клеток, а также изменения в транскрипционной активности STAT и JNK. Он также может обнаруживать эндогенно помеченные GFP белки, включая криптохром (светочувствительный белок растений и животных) и синаптический маркер Brp.
С помощью метода ИФА можно идентифицировать известные генетические регуляторы глиального синаптического поглощения. Когда ученые использовали этот анализ для проведения мелкомасштабного скрининга, они выявили синтаксины в качестве потенциальных регуляторов элиминации синапсов, опосредованных астроцитами.
Вместе эти исследования устанавливают ИФА как быстрый, простой и количественный метод скрининга in vivo, который может быть использован для анализа широкого спектра фундаментальных биологических вопросов.
